細胞計數通用步驟有什么？有何注意事項？

細胞計數是指對細胞數量進行定量測定的方法。在細胞培養實驗中，通過細胞計數來確定細胞培養的密度和數量，可以掌握細胞生長的情況。同時，細胞計數也是衡量不同實驗條件下細胞生長情況的重要指標之一。那么你知道細胞計數通用步驟有什么嗎？有何注意事項呢？讓我們一起來看看吧！

一、細胞計數的通用方法

1. 以貼壁生長的細胞為例，消化后的細胞充分重懸吹散，取一部分轉移至干凈的EP管內，例如1mL;

2. 使用酒精棉球輕輕擦拭計數板表面和蓋玻片，把后者的邊緣微微濕潤，然后小心蓋在計數板的正中間，邊緣要能覆蓋住計數板上的凹槽；

3. 將剛才轉移至EP管內的細胞懸液再次進行重復吹打，直到成為單細胞懸液，然后吸20uL懸液出來；

4. 將移液器吸頭抵在蓋玻片的上邊緣或下邊緣，然后緩緩打出液體，此時液體會因為虹吸作用被吸入蓋玻片和計數板之間的空隙內；

5. 調整顯微鏡，使用10倍物鏡觀察，此時，視野內看到的畫面應該如下圖所示的中間圓形的紅色區域；

6. 接下來，要計算圖中藍色區域的25個格子內的細胞總數，這一塊區域的總面積是1mm2；

7. 計算出總數后，按照下方公式進行計算，得到的結果就是細胞濃度，單位是個/mL

「25個格子內的細胞總數 x 10,000 = 細胞濃度」

8. 進一步計算，可以得到細胞總數。

「重懸細胞的培養基體積 x 細胞密度 = 細胞總數」

二、血球計數板的注意事項

1. 細胞懸液的制備：需要將細胞懸液che底吹散為單細胞懸液，否則大量細胞團塊的存在會讓細胞計數結果有偏差；單細胞懸液準備好后，應立即往下操作，而不能等，否則細胞又會慢慢聚集沉降成團；

2. 計數階段：有的細胞會剛好落在計數板小方格的線上，此時，要遵循數左不數右，數上不數下的原則進行計數；

3.細胞太多或太少：如果數完25個格子，總數在200-500之間（圖a），可以繼續往下換算；

如低于200，則應該把整個懸液區域一起計數（圖b），然后得數乘以1111得到細胞濃度；

如果大于500，則應該重新計數，但只計算25個放個內的單條對角線上的5個格子的總數（圖c），然后乘以50,000得到細胞濃度；

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