Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟(6孔板)

一、Lipo 2000介紹

賽默飛Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多功能轉(zhuǎn)染試劑，經(jīng)證明可以將各種有效載荷有效地轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細(xì)胞系中。

二、Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟

1.轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，細(xì)胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%。細(xì)胞鋪板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中.2.對(duì)于每孔細(xì)胞，使用250 u無(wú)血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混勻。

3.使用前將Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻，用250 u無(wú)血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEM|培養(yǎng)基)稀釋10 ul Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。Lipo 2000稀釋后，在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE:若使用DMEM培養(yǎng)基，則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。

4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipo 2000(第三步)。室溫放置20分鐘。

5.(optional)將6孔板中的舊營(yíng)養(yǎng)液吸出，用無(wú)血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入2 ml無(wú)血清配養(yǎng)基。

6.直接將復(fù)合物加入到每孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。

7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時(shí)。無(wú)需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。或者在4-5小時(shí)后更換培養(yǎng)生長(zhǎng)基也不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性，

8.在細(xì)胞中加入復(fù)合物24-72小時(shí)后，分析細(xì)胞抽提物或進(jìn)行原位細(xì)胞染色，檢測(cè)報(bào)告基因活性。這依賴于細(xì)胞類型和啟動(dòng)子活性。對(duì)穩(wěn)定表達(dá)，在開(kāi)始轉(zhuǎn)染一天后將細(xì)胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)需要數(shù)天或數(shù)周。貼壁細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:

轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，將細(xì)胞以z1:10的比例傳代至新鮮培養(yǎng)基中，次日加入選擇性培養(yǎng)基。

三、Lipo2000購(gòu)買渠道

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