重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟

一、重組蛋白

重組蛋白（recombinant protein）是指應(yīng)用重組 DNA 或重組 RNA 技術(shù)而獲得的蛋白質(zhì)。重組蛋白工程先應(yīng)用基因克隆或化學合成技術(shù)獲得目的基因（gene of interest，GOI），連接到適合的表達載體，導(dǎo)入到特定的宿主細胞，利用宿主細胞的遺傳系統(tǒng)，表達出有功能的蛋白質(zhì)分子。重組蛋白的正確溶解步驟包括離心、溶解和（可能的話）進一步處理。

二、重組蛋白溶解步驟一

開蓋前離心試劑管。凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上，所以在打開塑料瓶蓋前，需將凍干粉通過離心收集到管底，以便用很小體積的液體即可將凍干粉wan全溶解。一般需要3000-3500rpm離心5min，效果良好。如果沒有高速離心機，可以使用較低的轉(zhuǎn)速進行較長時間的離心。

?三、重組蛋白溶解步驟二

用無菌水重懸至0.1-1.0 mg/ml，不可振蕩。這個步驟即為溶解步驟，非常重要。使用推薦的溶液將凍干粉重懸至適當?shù)臐舛取τ诙唐趯嶒灒?/span><=7天），建議的濃度不低于100 μg/mL。對于長期實驗（>=7天），需要使用含載體蛋白（如BSA、HSA、FBS或海藻糖）的溶液進一步稀釋，然后分裝凍存于-20°C至-80°C。一定要用推薦的溶液重懸(或溶解)凍干粉。蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強度。產(chǎn)品說明上所標明的溶解液是能夠?qū)⒃摷毎蜃踊蛑亟M蛋白wan全溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符，很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能wan全溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。

四、重組蛋白溶解步驟三

該重懸液在2-8℃最長可保存1周。用說明書上推薦的溶液將細胞因子或重組蛋白重懸到推薦的濃度后，細胞因子或重組蛋白可放置在2-8℃，即冰箱的冷藏室。在這種條件下，細胞因子或重組蛋白的活性最長可保持1周。這對一個周期為5-7天的實驗，如DC(樹突狀細胞)的誘導(dǎo)成熟是足夠的。在此期間，只要每次從冰箱里吸取一定量的細胞因子或重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可。

其實，說明書上推薦的濃度對于一般的實驗來講是比較高的。所以用戶通常會將該溶液進一步稀釋后再放在4℃保存，待1周內(nèi)用完。如進行稀釋，必須遵照下面第4步的方法，即需用含載體蛋白的溶液進行稀釋，否則稀釋后的細胞因子或重組蛋白很容易會粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的細胞因子或重組蛋白的濃度下降，細胞因子或重組蛋白的總活性則大為減弱。

五、RD重組Monkeypox蛋白產(chǎn)品推薦

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