Trizol法提取RNA的注意事項與常見問題有哪些？

Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事項和常見問題呢？讓我們一起來看看吧！

一、Trizol法提取RNA的注意事項

在使用TRIZOL的時候要帶手套和眼罩，避免接觸到皮膚和衣服，使用化學通風櫥，防止蒸汽吸入。

從少量樣品（1-10mg組織或102-104細胞）中提取RNA時可加入少許糖原以促進RNA沉淀。例如加800ml TRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原會與RNA一同沉淀出來，糖原濃度不高于4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反應。

勻漿后加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。

分層和RNA沉淀時也可使用臺式離心機，2600×g離心30-60分鐘。

預期產量：1mg組織或1×106細胞提取RNA分別為：

肝和脾6-10μg ,腎3-4μg ,骨骼肌和腦組織1-1.5μg ,胎盤1-4μg ,上皮細胞8-15μg ,成纖維細胞5-7μg。

二、Trizol法提取RNA的常見問題

1. 得率低

（1）樣品裂解或勻漿處理不che底

（2）RNA沉淀未wan全溶解

2. OD260/OD280<1 .65

（1）檢測吸光度時，rna樣品沒有溶于水，而溶于了TE中

（2）樣品勻漿時加的試劑量太少

（3）勻漿樣品時未在室溫放置5分鐘

（4）吸取水相時混入了有機相

（5）RNA沉淀未wan全溶解。

3. RNA降解

（1）組織取出后沒有馬上處理或冷凍

（2）待提取RNA的樣品沒有保存于-60至-70℃,而保存在了-5至-20℃

（3）細胞在用胰酶處理時過度

（4）溶液或離心管未經RNase去除處理

（5）電泳時使用的甲醛pH值低于了3.5

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