qPCR實驗的Ct值有什么作用？

qPCR擴增過程中，擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環數（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴增達到一定產物量時，所對應的循環數。那么你知道qPCR實驗中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！

一、指數擴增、模板量與Ct值的關系

理想情況下，qPCR中的基因經過一定的循環數被指數擴增而積累，擴增循環數和產物量之間的關系是：擴增產物量=起始模板量×（1+En）循環個數。然而qPCR反應并不是一直處于理想情況下，當擴增產物量達到“一定產物量"時，此時循環個數為Ct值，處于指數擴增時期。Ct值與起始模板量的關系：模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系。起始模板量濃度越高，Ct值越小；起始模板量濃度越低，Ct值越大。

二、擴增曲線、熒光閾值與一定產物量

qPCR擴增產物量是以熒光信號的形式直接呈現，也就是擴增曲線。在PCR早期，擴增處于理想情況下，循環數較少，產物積累少，產生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區別，之后熒光的產生增加進入指數期。可以在PCR反應剛處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量，以此作為“一定產物量"，并且由此來推斷模板最初的含量。因此，一定產物量對應的熒光信號強度，也就是熒光閾值。

在PCR的后期，擴增曲線不再呈現指數擴增，進入線性期和平臺期。

三、Ct值的重現性

PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極hao，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

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