血清使用常見(jiàn)問(wèn)題

l 血清

血清是生長(zhǎng)和附著因子、礦物質(zhì)、脂質(zhì)和激素的來(lái)源，是細(xì)胞培養(yǎng)的重要組分。血清能調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的通透性，同時(shí)能作為載體攜帶酶、脂質(zhì)、酶和微量元素等進(jìn)入細(xì)胞。

l 血清使用的常見(jiàn)問(wèn)題

Q1. 收到的血清有部分解凍的現(xiàn)象，影響后續(xù)使用嗎？

正常情況下，血清應(yīng)冷凍送達(dá)。但是如果血清有部分解凍，仍可繼續(xù)使用。血清在解凍后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求分裝成單次用量后再進(jìn)行儲(chǔ)存以供后續(xù)使用。

Q2. 血清需要避光保存嗎？

正常情況下，在室內(nèi)或?qū)嶒?yàn)室燈光的照明下，不影響血清的使用。但不建議將血清暴露在波長(zhǎng)短或強(qiáng)度高的光下，因?yàn)檠逯?/span>含有一些對(duì)光敏感的成分。

Q3. 血清必須熱滅活嗎？

熱滅活可以破壞血清中補(bǔ)體的活性。哺乳動(dòng)物血清中存在的補(bǔ)體蛋白參與細(xì)胞的溶解，收縮平滑肌，刺激細(xì)胞和血小板釋放組胺，并激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。有研究比較了正常熱滅活胎牛血清對(duì)各種細(xì)胞株的生長(zhǎng)能力影響（如下圖所示），發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中，熱滅活對(duì)6株細(xì)胞有負(fù)面影響（紅框）、3株無(wú)影響（綠框）、2株有微弱正面改善（黃框），因此在多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清不需要熱滅活，熱滅活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用，反而還會(huì)影響血清質(zhì)量，使細(xì)胞的生長(zhǎng)速率降低。因此如果不是非必須，可不必做血清熱滅活這一處理。

圖1 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況

Q4. 培養(yǎng)哪些細(xì)胞需要熱滅活血清？

培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞（ESC）、平滑肌細(xì)胞、免疫細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞時(shí)，建議使用熱滅活血清。

Q5. 血清如何熱滅活？

有研究表明，熱滅活時(shí)若水浴溫度過(guò)高或加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，都會(huì)降低血清的性能，從而影響細(xì)胞生長(zhǎng)（如下圖2和3所示）。因此建議將血清加熱至56 °C，持續(xù)30分鐘進(jìn)行熱滅活。

圖2 使用不同溫度熱滅活血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

圖3 使用不同時(shí)間熱滅活血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

注意：滅活時(shí)，若使用水浴槽，請(qǐng)保持水面與血清液面等高。滅活后，建議使用冷水浴降溫。

Q6. 什么是γ-輻照血清？

γ-輻照是將血清暴露于25-35 kGy劑量的鈷-60源，使病毒和支原體等其他微生物菌體失活。γ-輻照不會(huì)降低血清的理化特性或細(xì)胞培養(yǎng)性能。

Q7. FBS的顏色與之前的批次不一樣。這會(huì)影響血清性能嗎？

血清中含有微量的血紅蛋白，血清的顏色取決于血紅蛋白濃度，顏色的深淺和血清的性能無(wú)關(guān)。